(1)同情发情
实质是诱导母牛群体在同一时期发情排卵的方法,在牦牛生产中的主要意义是便于组织生产和管理,提高牛群的发情率和繁殖率。另外,同期发情技术有利于人工授精技术的进一步推广,同时也是胚胎移植技术的重要环节。目前,用于牦牛同期发情的药物主要有激素和中药制剂两大类,激素主要包括GnRH及其类似物、前列腺素(PGF2α)或类似物、促性腺激素类。处理方法有单激素处理、激素组合处理、中药制剂处理等,其中激素组合处理方法有三合激素法、前列腺素(PGF2α)+促性腺激素法、GnRH类似物+促性腺激素法等。给药途径有肌内注射、阴道栓埋植和灌服法。处理次数有一次处理和二次处理,其中二次处理发情率高于一次处理。由于牦牛同期发情受生殖生理状况、激素种类、激素剂量、处理方法及营养水平等因素的影响,目前报道的牦牛同期发情率差异很大,从0到100%不等。实践证明,牦牛同期发情受牦牛自然繁殖规律的制约性强。因此,在今后研究与应用中,应严格遵从牦牛繁殖特性与自然繁殖规律,这样才能使牦牛同期发情技术广泛应用于生产实际。
(2)超数排卵
简称为超排,是提高母牛繁殖效率的繁殖调控技术之一,通常用于母牛的胚胎移植中。2002年中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所牦牛课题组首次成功进行放牧牦牛超数排卵试验研究,探索了牦牛超数排卵FSH剂量、方法、胚胎冲取及冷冻等技术,3头牦牛共获得17枚胚胎,填补了牦牛超数排卵研究的空白。权凯等(2007)报道,用8.8毫克FSH(中国科学院动物研究所研制)对3头半血野牦牛进行超数排卵,头均获得4枚有效胚胎;用15毫克FSH(新西兰产)对3头半血野牦牛进行超数排卵,头均获得0.7枚有效胚胎;但FSH8.4毫克组、PVP包埋FSH8.5毫克组均没有得到胚胎。李全等(2008)报道国产激素9毫克FSH+9毫克PG+1000单位hCG组合与9毫克FSH+9毫克PG组合对繁殖季节中的牦牛进行超排处理,都可以引起反应,但个体间知拦超排反应差异较大。牦牛对超排药物的敏感程度受环境、季节和营养状况影响较大,超数排卵效果不稳定,超排有效胚胎数较黄牛、奶牛少。另外,抓捕保定对牦牛的刺激和药物用量对超排效果的影响尚需进一步的研究和完善。
(3)胚胎移植
是将良种母牛的早期胚胎取出,或者是由体外受精及其他方式获得的胚胎,移植到生理状态相同的母牛体内,使之继续发育成为新个体。提供胚胎的母牛称为供体(Donor),接受胚胎的母牛称为受体(Recipient)。胚胎移植实际上是生产胚胎的供体母牛和养育后代的受体母牛分工合作,共同繁殖后代。所以也有人通俗地叫借腹怀胎。胚胎移植实际上是产生胚胎的供体和养育胚胎的受体分工合作共同繁殖后代的过程。胚胎移植产生的后代,遗传物质来自供体母牛和与之交配的公牛,而发育所需的营养物质则从受体(养母)获得。因此,供体决定着它的遗传特性(基因型),受体只影响它的体质发育。胚胎移植的意义在于充分发挥优良母牦牛的繁殖潜力;缩短世代间隔,及早进行后裔测定;保存品种资源;使不孕母牦牛获得生育能力;促进搭纳胡基础理论研究;满足畜牧业现代化的需要。
牦牛胚胎移植研究相对于奶牛、黄牛较晚。1991年,陈静波等对牦牛胚胎移植首次进行了尝试研究,将10枚中国荷斯坦奶牛胚胎分别移植到10头牦牛受体内,结果只有1头妊娠,但最终死亡(陈静波等,1995)。表明牦牛支持普通牛胎儿整个妊娠期的发育,但仍有不确定性因素影响其发育,需进一步研究。2004年,甘肃农业大学动物医学院和甘肃省天祝白牦牛育种实验场共同开展了天祝白牦牛胚胎移植试验,经过药物调理、同期发情、超数排卵等技术处理,平均胚胎回收率55.6%,共收集18枚可用胚胎,将12枚胚胎移植到10头同期发情的受体牦牛,最终妊娠率50%,分娩率40%(余四九等,2007)。此试验首开牦牛胚胎移植的先河,为世界珍稀牛种——天祝白牦牛种质资源保护、纯繁扩群、持续利用起到了积极的推动作用。随后,姬秋梅等(2007)开展了西藏当雄牦牛胚胎移植试验,处理10头供体牛共获得7枚胚胎,PGF2α+FSH连续递减法得到5枚可用胚胎,Cu-Mate+FSH法没有冲到胚胎,5枚胚胎移植给5头受体后妊娠并出生4头犊茄弯牛,胚胎移植在西藏获得成功。牦牛胚胎移植虽然取得成功,但胚胎来源比较困难,同时在超数排卵和移植技术水平方面还有待于进一步改进和完善。随着牦牛胚胎移植技术的不断完善和提高,胚胎移植技术将成为牦牛快速扩繁和其他高新技术应用的有效技术手段,具有广阔的应用前景和重要的现实意义。
(4)体外受精
是指母牛的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。由于它与胚胎移植技术(ET)密不可分,又简称为IVF-ET。在生物学中,把体外受精胚胎移植到母体后获得的动物称为试管动物(Test-tubeanimal)。奶牛、水牛、黄牛等的体外受精已获得成功,并得到了试管动物,而牦牛体外受精的研究还处于试验研究阶段。Luo等(1994)从4头母牦牛8个卵巢共收集25个卵母细胞,经体外成熟和体外受精培养后,卵母细胞的受精率及卵裂率分别为60%和40%,发育正常的桑椹胚2个,移植后未妊娠。随后,金鹰等(1999)研究了黑白花冷冻精液×牦牛卵母细胞的种间体外受精研究;何俊峰等(2005)研究了受精液和受精时间对牦牛卵泡卵母细胞体外受精的影响;阎萍等(2006)研究了不同激素配比、性周期阶段对白牦牛卵母细胞体外成熟的影响。但普遍存在的问题是受精卵的卵裂率和囊胚体外发育率结果不稳定,因而体外受精的总成功率偏低。目前对牦牛卵母细胞体外成熟、体外受精和受精卵的体外发育培养的系列研究仍然在继续。
2005年中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所成功建立了牦牛胚胎体外生产体系,同时建立了牦牛种间杂交胚胎体外发育体系,为探索异种配子受精的发育过程,F1~F3代杂种雄性犏牛不育的机理及异种间细胞核、质互作提供有力的实验手段。郭宪等(2012)进一步优化实验方案,建立并完善了牦牛胚胎体外生产技术体系。
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